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Hiper Taq DNA Polymerase是嗜热性Thermus aquaticus表达的热稳定重组型DNA聚合酶，分子量为94 KD。具有5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，无3'→5'外切酶活性。扩增产物具有3'-dA，可直接用于TA克隆。

• 核酸外切酶残留检测：10U本品和0.5μg λDNA-Hind Ⅲ，37℃下孵育4h，DNA的电泳谱带无变化。
  
• 切口酶残留检测：10U本品和0.5μg IL23R质粒，37℃下孵育4h，DNA的电泳谱带无变化。
  
• RNase残留检测：10U本品和0.5μg 293T细胞总RNA，37℃下孵育1h，RNA的电泳谱带无变化。

• PCR反应体系（冰上配制）
  

  成分	用量	终浓度
  ddH2O	至50μL	-
  10×Taq Buffer (Mg2+ Free)	5μL	1×
  25mM MgCl2	3μL	1.5mM
  dNTP Mix (10mM each)	1μL	0.2mM
  模板DNA	optional	-
  引物1(10μM)	2μL	0.4μM
  引物2(10μM)	2μL	0.4μM
  Hiper Taq DNA Polymerase (5U/μL)	0.4μL	0.04U/μL

  
  注:
  
  • Mg²⁺终浓度：Mg²⁺最佳浓度为1.5～2mM，如有需要，可0.2～0.5mM为间隔向上摸索Mg²⁺最佳使用浓度。
    
  • 聚合酶添加：室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性，为了防止非特异性扩增，建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
    
  • 聚合酶浓度：推荐使用0.04U/μL。可以在0.025～0.04U/μL之间进行优化。
    
  • 不同模板的推荐使用量（50μL反应体系）：

    模板种类	扩增片段
    基因组DNA	50ng～100ng
    质粒DNA	10pg～20ng
    cDNA	1～5μL（不超过反应体系的1/10）

  
  
• PCR扩增程序
  

  步骤	温度	时间	循环数
  预变性	94	30sec～5min	1
  变性	94	30sec	35
  退火	50-60	30sec
  延伸	72	60sec/kb
  终延伸	72	10min	1

  
  注:
  
  • 预变性温度和时间：推荐使用94℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min；高GC含量模板为5～10min。
    
  • 退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20sec，可以在10～30sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
    
  • 扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止DNA发生降解。